Целевая геномная интеграция и реорганизация с использованием первичной сборки

Хотя терапевтическое редактирование генома обладает большим потенциалом для лечения различных унаследованных и приобретенных расстройств, целевая установка средне-крупной генной модификации в лечебных клетках попрежнему сопряжена с трудностями1. Здесь мы разрабатываем первичную сборку - подход, который позволяет собирать последовательность ДНК и интегрироваться в человеческие клетки с помощью ориентированного CRISPR двойного синтеза флапа. Этот метод позволяет программирования РНК по конкретным участкам интегрировать отдельные или двойные фрагменты ДНК. В отличие от гомологического ремонта, первичная сборка также активна в разделительных и недивирующихся клетках. Мы применили первичную сборку для проведения целевого перекодирования exon, трансгенной интеграции и мегабазовых реструктуризаций, в том числе на имеющих отношение к терапии лоси первичных человеческих клеток. Первичная сборка расширяет возможности инженерии генома, позволяя целенаправленно интегрировать средне- и крупноразмерные последовательности ДНК без опоры на двойных доноров ДНК, двухуровневые разрывы или прогрессирование клеточного цикла. Инструмент CRISPR-Cas9 предоставляет беспрецедентные возможности для создания генома человека. Однако, поскольку большинство генетических расстройств вызвано разнородными мутациями, общие подходы к замене более крупных последовательностей ДНК могут обеспечить универсальные решения с учетом конкретных генов для лечения большинства патогенных мутаций, вызывающих болезни. Кроме…